Le diagnostic des infections virales est en constant développement, tant en ville qu’en milieu hospitalier. Les techniques classiques du diagnostic virologique, culture, détection d’antigéne et d’anticorps, microscopie électronique, présentent certaines lacunes que les techniques de biologie moléculaire permettent de combler en partie. L’objectif de cet article est de présenter les principales techniques de virologie moléculaire et leurs applications en pratique courante, dans les laboratoires de virologie. Une première partie abordera sous un angle technique les méthodes déhybridation moléculaire avec ou sans amplification du signal et les méthodes déamplification d’acide nucléique, avec notamment l’amplification génique. La seconde partie traitera des principales applications de ces techniques à la détection, la quantification et le typage des virus en pratique courante. Nous aborderons en particulier le diagnostic d’infections du système nerveux central par des virus neurotropes tels l’herpès simplex virus, le cytomégalovirus humain, le virus JC ou les entérovirus, la notion de charge virale HIV ainsi que le génotypage du virus de l’hépatite C.